2019 年底,一項全新的 Western blot 成像技術(shù)—eBlot 接觸式成像,在中國的上海醫谷創(chuàng )新面世。這項技術(shù)完美解決了傳統 Western blot 成像儀器的靈敏度不夠、定量范圍窄、成像時(shí)間太長(cháng)以及占地面積太大的問(wèn)題;相對于冷 CCD 成像技術(shù),eBlot 接觸式成像將成像靈敏度提升了 2-3 個(gè)數量級, 定量范圍提升 2 個(gè)數量級, >95% 的樣品成像時(shí)間縮短到 1 秒以?xún)?,且儀器的體積縮小到傳統儀器的 1/10 不到。該技術(shù)一面世就受到科研人員的認可,已幫助北京大學(xué)、上海交通大學(xué)、中科院、中國CDC等眾多國家學(xué)術(shù)研究單位解決了他們研究中遇到的 Western blot 成像難題。
欲了解此技術(shù)的詳情,我們還需要從 Western blot 的歷史和 Western blot 成像方法的歷史講起。
1981 年美國斯坦福大學(xué)的喬治·斯塔克(George Stark)發(fā)明了蛋白質(zhì)印跡(Western blot),至今已有 40 年的時(shí)間。Western blot 作為一個(gè)經(jīng)典的蛋白定量技術(shù),被越來(lái)越多的人所使用,已成為每個(gè)分子生物學(xué)實(shí)驗室所必須要做的一個(gè)實(shí)驗。但是 Western blot 技術(shù)本身的發(fā)展卻非常緩慢,尤其在成像檢測技術(shù)方面已有 20 多年的時(shí)間沒(méi)有新的突破。
Western blot 常用的幾種成像方法及優(yōu)劣勢如下:
成像方法 | 優(yōu)勢 | 劣勢 | |
直接顯色法 | DAB顯色 | 1,操作簡(jiǎn)單 2,無(wú)需暗房 3,無(wú)需成像設備 4,成本低 | 1,靈敏度低,低豐度蛋白無(wú)法檢測 2,定量范圍窄,只有 1.5OD,表達差異大的蛋白無(wú)法準確定量 |
化學(xué)發(fā)光法 | 暗房壓片 | 1,壓片過(guò)程沒(méi)有光損失,靈敏度高,可以實(shí)現極微弱信號的成像 2,無(wú)需購置設備 | 1,需要一個(gè)獨立的暗房 2,定量范圍窄,只有 1.8OD,表達差異大的蛋白無(wú)法準確定量 3,需要膠片、顯影液定影液等耗材 |
冷 CCD 成像 | 1,定量范圍高,高達 4.8OD,表達量差異大的蛋白可以準確定量 2,檢測靈敏度高 | 1,成像過(guò)程有大量的光損失,達不到壓片的靈敏度,非常低豐度的蛋白檢測不到 2,需要購置冷 CCD 成像設備、維護成本* | |
熒光法 | RGB 可見(jiàn)熒光 | 1,可以實(shí)現多重檢測 | 1,Western 膜本身的熒光背景非常高,導致成像靈敏度非常低,低豐度蛋白檢測不到 2,操作過(guò)程需要在避光的環(huán)境下進(jìn)行 3,熒光抗體種類(lèi)不夠多且成本高 4,多重檢測需要做大量的實(shí)驗條件優(yōu)化 5,需要特殊的試劑 6,熒光成像設備成本高 |
近紅外熒光 | 1,可以實(shí)現多重檢測 2,相對于可見(jiàn)熒光背景低 | 1,Western 膜本身的熒光背景導致成像靈敏度不夠,低豐度蛋白檢測不到 2,操作過(guò)程需要在避光的環(huán)境下進(jìn)行 3,熒光抗體種類(lèi)不夠多且成本高 4,多重檢測需要做大量的實(shí)驗條件優(yōu)化 5,需要特殊的試劑 6,近紅外熒光成像設備成本非常高 |
在各種成像方法中,冷 CCD 化學(xué)發(fā)光成像由于具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、定量范圍寬等優(yōu)勢,成為了受歡迎的成像方法,被超過(guò) 99% 的科研人員所使用。
但是,隨著(zhù)科研的不斷深入,科研人員反應 Western blot 也越來(lái)越難做,科學(xué)家在 Western bot 方面面臨的難題具體表現在:
雖然冷 CCD 化學(xué)發(fā)光成像方法有多種優(yōu)勢,被絕大多數人使用,但是由于其本身的技術(shù)限制,在面臨超低豐度蛋白、稀有樣品和表達差異巨大的樣品時(shí)就顯得無(wú)能為力了,這些隨著(zhù)科研逐步深入所帶來(lái)的難題急需新的技術(shù)出現來(lái)解決。
這些技術(shù)限制包括:
技術(shù)的瓶頸限制了冷 CCD 成像技術(shù)的發(fā)展,也間接影響科研的發(fā)展。工欲善其事必先利其器,必須要有更先進(jìn)的技術(shù)才能突破現有方法的瓶頸,進(jìn)而更好的為科研服務(wù)。
科學(xué)進(jìn)步的歷史進(jìn)程中,儀器公司扮演了極其重要的角色,科學(xué)家開(kāi)發(fā)出新的技術(shù),儀器公司利用這些技術(shù)開(kāi)發(fā)出新的工具來(lái)服務(wù)更多的科學(xué)家,循環(huán)往復,持續進(jìn)步。
Western 成像領(lǐng)域同樣是這樣,eBlot擁有科學(xué)家團隊和創(chuàng )新經(jīng)驗豐富的儀器團隊,技術(shù)和創(chuàng )新的思想碰撞出了一個(gè) Western 成像領(lǐng)域的革命性突破—eBlot 接觸式成像技術(shù)。這項革命性創(chuàng )新的技術(shù)克服了現有技術(shù)在成像靈敏度、定量范圍、成像速度和儀器體積大等諸多瓶頸,實(shí)現了 Western 成像技術(shù)新的飛躍,幫助科學(xué)家在新的科形勢下的研競爭中取得先機。
eBlot 接觸式成像技術(shù)主要突破點(diǎn)如下:
1,Western 膜直接貼在感光芯片上進(jìn)行成像,所有信號均被采集,沒(méi)有任何光損失,飛躍的提高了成像的靈敏度。
2,成像芯片的面積是現有成像技術(shù)芯片面積的 137 倍,超大的感光芯片具有超高的信號采集能力,讓極其微弱的信號都無(wú)處可藏。
3,單個(gè)像素尺寸是現有成像技術(shù)單個(gè)像素尺寸面積的 493 倍,巨大的像素可以將定量范圍提升兩個(gè)數量級,實(shí)現對樣品的定量。
4,新的成像技術(shù)不再依賴(lài)于鏡頭進(jìn)行成像,消除了鏡頭透鏡組造成的光信號損失。
5,新的成像技術(shù)可以將儀器體積壓縮到小于現有成像儀器體積的 1/10,大大節省實(shí)驗室空間。
生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)展越來(lái)越快,科研也進(jìn)入到范圍的高度競爭狀態(tài),科研人員要跟*的科學(xué)家競爭,這種新形勢下的競爭對于先進(jìn)工具的依賴(lài)越來(lái)越高。eBlot化學(xué)發(fā)光成像儀,幫助中國的科學(xué)家在新形勢下的激烈競爭中*。
eBlot 在北京大學(xué)等各個(gè)實(shí)驗室
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