Autoinductive Terrific Broth產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品描述：

自動(dòng)誘導超級肉湯(Autoinductive Terrific Broth)也稱(chēng)自動(dòng)誘導TB培養基，用于Lac啟動(dòng)子驅動(dòng)的大腸桿菌重組蛋白表達，無(wú)需添加IPTG。自誘導TB培養基能夠獲得高細胞密度，蛋白表達率高出IPTG誘導過(guò)程好幾倍。

工作原理：

Terrific Broth 由LB培養基改進(jìn)而來(lái)，目的是獲得高密度細胞。E. coli在該培養基中生長(cháng)速度快于其在LB培養基或 2x YT肉湯中的生長(cháng)速度。使用TB培養基還可以獲得高產(chǎn)量質(zhì)粒DNA和重組蛋白。

通常，外源蛋白在細菌中表達時(shí)常使用IPTG誘導的啟動(dòng)子，如Lac啟動(dòng)子。當細胞密度達到理想值時(shí)，通過(guò)向培養基中加入IPTG的方法誘導蛋白表達。使用這個(gè)自動(dòng)誘導培養基，不再需要監測細胞密度和添加IPTG。葡萄糖作為半乳糖操縱子的阻遏因子阻止細菌利用α-乳糖，而被優(yōu)先代謝，促進(jìn)高密度生長(cháng)。一旦培養基中的葡萄糖被耗盡（通常發(fā)生在對數期的后期），乳糖被?-半乳糖苷酶轉換成異乳糖（葡萄糖-1,6-半乳糖），而后者作為IPTG誘導型啟動(dòng)子的誘導劑，引起乳糖阻遏子從與DNA結合的位點(diǎn)上釋放，啟動(dòng)重組蛋白的表達。對于DE3基因型的E.coli中，異乳糖使T7lac啟動(dòng)子去阻遏，并誘導lacUV5啟動(dòng)子表達T7 RNA聚合酶。通過(guò)這種方式，在細菌培養物生長(cháng)到某一特定點(diǎn)時(shí)蛋白表達自發(fā)開(kāi)始，去掉了監測細胞密度（OD600）和添加IPTG這兩個(gè)步驟。與傳統IPTG誘導的蛋白表達過(guò)程相比，使用自動(dòng)誘導培養基極大地方便和簡(jiǎn)化了試驗流程。另外還便于多克隆分析，如藍白斑篩選。

該培養基中含有理想比例的葡萄糖和α-乳糖作為碳源和能量來(lái)源。胰蛋白胨提供氮源、維生素、礦物質(zhì)和氨基酸，這些營(yíng)養成分是細胞生長(cháng)所必需的。酵母提取物是豐富的B族維生素來(lái)源。Studier salts為細菌細胞的生長(cháng)提供最佳的生理環(huán)境。

配方與配制方法

1. 稱(chēng)取55.55g 脫水培養基粉末，用1L去離子水加熱溶解。
2. 煮沸1min。
3. 115°C 滅菌20min。

不要過(guò)度加熱，避免乳糖分解和培養基顏色加深。冷卻后保存在2-8oC，如果不染菌，可以保存2個(gè)月左右。