肝臟是一個(gè)復雜的器官，由多種細胞類(lèi)型組成。 其中大部分（60-80%）是實(shí)質(zhì)細胞——肝細胞。 其余細胞形成異質(zhì)的非實(shí)質(zhì)細胞 (NPC) 群，主要由肝內皮細胞 (LEC)、巨噬細胞（KF），肝星狀細胞 (HSC) 和免疫細胞組成。 肝內免疫細胞是 NPC 突出的成分（高達 50%），由 T 細胞（CD8+ 和 CD4+）、B 細胞、自然殺傷 (NK) 和自然殺傷T (NKT) 細胞、中性粒細胞、單核細胞和樹(shù)突狀細胞 (DC) 和巨噬細胞的各種亞型組成。 肝臟免疫細胞的相對組成因生理條件和物種而異，例如，小鼠肝臟中的 NKT 細胞比人類(lèi)多。 肝臟免疫細胞組成不同于淋巴器官或血液，因為肝臟富含 CD4+ T 細胞、NK、NKT 和 γ δ (γδ) T 細胞。細胞比例分布參考如下圖。

一般來(lái)說(shuō)，肝臟主要是致耐受性器官，對于預防對飲食和腸道菌群的炎癥反應很重要。 因此，NPC 積極促進(jìn)免疫耐受，例如，肝細胞、枯否細胞 (KC) 和 LEC 誘導 T 細胞無(wú)反應。 此外，肝竇LEC (LSEC) 產(chǎn)生稱(chēng)為 LSECtin 的凝集素，可觸發(fā) CD8+ T 細胞耐受。 此外，KC 分泌抗炎細胞因子白細胞介素 10 (IL10) ，肝臟駐留的 NK 細胞可通過(guò)與免疫檢查點(diǎn)通路的相互作用抑制 T 細胞。 在某些病理條件下，例如感染、炎癥性疾病或癌癥，肝臟免疫細胞的分布或功能可能會(huì )發(fā)生變化。 這可能導致潛在的不平衡和免疫細胞串擾的改變。

為了更好地了解影響肝臟的各種病理，需要對常駐/浸潤性免疫群體進(jìn)行分離、免疫表型分析和量化。 目標是獲得高產(chǎn)量的單細胞懸液，同時(shí)仍保留抗原/表位譜（最小表位降解）并為后續下游應用保留細胞活力。為了避免存在于血液中免疫亞群中的肝臟交叉污染，肝臟的原位灌注是通過(guò)腔靜脈或門(mén)靜脈進(jìn)行的。 另一個(gè)關(guān)鍵步驟是正確處理肝組織。 組織解離可以通過(guò)機械破壞、使用膠原酶的酶消化或兩種方法的組合來(lái)進(jìn)行。 對于肝臟免疫細胞表型分析，需要從獲得的勻漿中去除肝細胞，因為它們可能會(huì )干擾以后的下游免疫分析。 可以通過(guò)多個(gè)離心步驟或通過(guò) Percoll 或 Iodixanol 密度梯度進(jìn)一步純化細胞懸液。 然而，這個(gè)過(guò)程既費時(shí)又費材料。 此外，純化方法的苛刻條件也可能影響用于任何下游應用的細胞的活力和/或功能。

小鼠肝臟灌注方案：

(A) 揭開(kāi)和拉伸門(mén)靜脈以進(jìn)行灌注。 (B) 肝灌注。 (C) 漸進(jìn)式灌注肝臟。 (D) 解離的材料準備。 帶有細胞培養基的 C 管，含解離肝臟的酶。 (E) 肝臟與解離混合物一起放入 C 管中。 (F) 解離后的肝臟勻漿。 (G) 分離組織的濾液。 (H) 基于密度梯度的細胞純化（細胞懸液頂部的碎片去除溶液層；離心前）。 (I) 獲得的細胞被殘留的紅細胞污染。 (J) 去除紅細胞后的最終NPC。

小鼠肝臟流式檢測Marker方案：

小鼠肝臟巨噬細胞清除方案：

LIPOSOMA的ClodronateLiposomes氯膦酸鹽二鈉脂質(zhì)體（貨號：CP-005-005）清除肝臟巨噬細胞，頻頻見(jiàn)于Cell，Nature和Science。詳細文獻可以聯(lián)系靶點(diǎn)科技技術(shù)支持索取全文。清除單核巨噬細胞是研究巨噬細胞體內功能的重要工具。